Anti-herpes 50

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En la actividad del virus simplex anti-herpes in vitro del extracto crudo de las raíces de Nauclea latifolia Smith (Rubiaceae) Resumen Antecedentes Nauclea latifolia Smith, un arbusto perteneciente a la familia Rubiaceae es una planta medicinal muy popular en Camerún y los países vecinos en los que se utiliza para tratar la ictericia, la fiebre amarilla, el reumatismo, dolores abdominales, hepatitis, diarrea, disentería, la hipertensión, así como la diabetes. El uso etno-medicinales contra la fiebre amarilla, la ictericia y diarrea nos llevó a investigar sobre la actividad antiviral de la corteza de la raíz de N. latifolia. En este estudio, HSV-2 se eligió como un modelo viral debido a su fuerte impacto en la transmisión del VIH y de adquisición. Métodos El extracto crudo bajo estudio fue preparado por maceración de cortezas raíces en polvo secados al aire y de N. latifolia en CH 2 Cl 2 / MeOH (50:50) mezcla durante 48 horas, entonces se sometió a filtración y la evaporación bajo vacío. Un análisis fitoquímico del extracto bruto se realizó por cromatografía líquida de alta junto con una matriz de fotodiodos y espectrometría de masas (HPLC-PDA-ESI-SGC). La actividad anti-HSV-2 se ensayó in vitro por reducción de la placa y ensayos de producción de virus y el principal mecanismo de acción se investigó por el tiempo virucida y de ensayos de adición. Los valores de datos se compararon mediante la suma de cuadrados extra prueba F del programa GraphPad Prism 4. Resultados Los principales componentes detectados en el extracto pertenecen a la clase de los alcaloides de indol característicos de Nauclea género. Strictosamide, vincosamide y pumiloside se identificaron tentativamente junto con glicósido de ácido quinóvico. N. extracto crudo latifolia inhibió tanto el aciclovir resistentes HSV-2 cepas sensibles y aciclovir, con valores de IC50 de 5,38 g / ml para el primero y 7,17 g / ml para el segundo. El extracto se encontró que era más activo cuando se añade después de la infección, con IC 50 de 3,63 g / ml. Conclusión Los resultados de este trabajo justifican en parte el uso empírico de N. latifolia en la medicina tradicional para el tratamiento de enfermedades virales. Este extracto puede ser un material áspero prometedor para el desarrollo de un nuevo y más eficaz moderno anti-HSV-2 medicamento también activos contra resistentes al aciclovir de HSV-2 cepas. Palabras clave N. raíces latifolia CH 2 Cl 2 / MeOH extraer actividad Fitoquímica Antiviral HSV-2 Antecedentes El herpes genital es una infección de transmisión sexual generalizada, causada por el virus herpes simplex (HSV), más comúnmente de tipo 2 (HSV-2) 1. Después de la infección primaria, el VHS-2 es transportada retrógradamente a los ganglios sensitivos lumbosacra, donde se establece una infección latente por vida que puede ser reactivado por el estrés, los cambios hormonales y la luz UV. Después de la reactivación, el VHS-2 pueden ser transportados al sitio primario de la infección que causa episodios asintomáticos o bien, que facilitan su propagación en la población, o ulceraciones recurrentes a la mucosa genital. Estas lesiones suelen ser muy dolorosas y pueden dar lugar a morbilidad psicológica sustancial 2. El virus también puede transmitirse de madre a hijo durante el parto con el riesgo de graves infecciones neonatales 3. Se ha estimado que la prevalencia global en personas con edades comprendidas 1549 años que vivían con el virus HSV-2 en todo el mundo en 2003 fue de 536 millones, mientras que el número estimado de nuevas infecciones por el VHS-2 entre los 1549 años de edad en todo el mundo en 2003 fue de 23,6 millones 4. La incidencia de recurrencia de HSV aumenta en las personas con un sistema inmunitario deteriorado, tales como individuos seropositivos al VIH y en receptores de trasplante 5. 6. Por otro lado, el herpes genital pueden aumentar el riesgo de contraer el VIH mediante la interrupción de las células epiteliales, con la inducción de la inflamación local y la producción de citocinas y quimiocinas que activan y reclutan células diana CD4 VIH 7. En una revisión sistemática incluyendo un meta-análisis de estudios longitudinales, prevalece la infección por VHS-2 se asoció con un triple aumento en el riesgo de transmisión del VIH en hombres y mujeres, lo que sugiere que, en las zonas de alta prevalencia del HSV-2, un alto proporción de la infección por VIH es atribuible a HSV-2 8. Por lo tanto, se espera que las estrategias que se pueden prevenir o tratar las infecciones por VHS para reducir las tasas de transmisión sexual del VIH 9. Actualmente no hay vacuna disponible. El tratamiento estándar para el tratamiento de las infecciones por VHS se basa en los análogos de nucleósidos que se dirigen a la ADN polimerasa viral. Estos incluyen aciclovir, penciclovir y sus derivados, valaciclovir y famciclovir 10. 11. Estos medicamentos antivirales pueden ser eficaces para tratar los signos y síntomas de episodios recurrentes primera y clínicos, pero su uso generalizado y el tratamiento profiláctico a largo plazo pueden estar asociados con una alta toxicidad relativa y la aparición de cepas de virus resistentes a los medicamentos, especialmente en pacientes inmunocomprometidos 12. Por estas razones, hay una gran demanda para el desarrollo de nuevos fármacos antivirales con nuevo modo de acción. En este contexto, los productos naturales a partir de extractos de plantas medicinales son muy importantes fuente de agentes-HSV anti y varios extractos y compuestos puros de medicamentos a base de hierbas se han reportado para ejercer una actividad anti-HSV 13. plantas africanas constituyen una fuente rica y todavía poco explorada de productos naturales de potencial interés médico 14. Nauclea Smith latifolia (syn:. Sarcocephalus Latifolius (Sm) Gruce) es un arbusto o árbol pequeño disperso de alrededor de 4 m de altura en abundancia extendido en toda África intertropical. En Camerún, las raíces se utilizan para tratar la ictericia, la fiebre amarilla, el reumatismo, dolores abdominales y la hepatitis y la corteza para tratar la ictericia y pérdida de apetito 15. En Nigeria, la corteza del tallo y las raíces de la planta se usan contra la fiebre, ictericia, la malaria, la diarrea, la disentería, la hipertensión y la diabetes 16. Los estudios farmacológicos de N. latifolia han demostrado antibacteriano 16, antidiabético 17 y 18 antiplasmodial actividades. estudios fitoquímicos anteriores sobre N. latifolia han producido un gran número de alcaloides, triterpenos, esteroides y saponinas 19 21. El uso tradicional contra la fiebre amarilla, la ictericia y diarrea nos llevó a investigar sobre la actividad antiviral de la corteza de la raíz de N. latifolia. El presente estudio se realizó para probar el extracto crudo de N. latifolia por su actividad antiviral aciclovir frente a cepas sensibles y resistentes, de HSV-2 y para investigar su presunta vía de acción. Métodos Material vegetal Las cortezas profundas de latifolia N. fueron recogidos en enero de 2011 a Makenn (región Centro, Camerún) e identificados en el Herbario Nacional de Yaundé (Camerún), donde se depositó un ejemplar de muestra (n 58281 / HNC). Preparación del extracto en bruto El aire se seca y cortezas raíz en polvo (1 kg) de latifolia N. se maceraron con CH 2 Cl 2-MeOH mezcla (6 L) durante 48 hrs. La filtración y eliminación del disolvente a vacío usando un evaporador dieron un extracto marrón (30 g) que se somete posteriormente a ensayos de fitoquímicos y biológicos. HPLC-PDA-MS N. análisis latifolia extracto crudo se analizó mediante un sistema Shimadzu LC-MS 2010EV equipado con un detector de fotodiodos SPD-M20A (Shimadzu, Dusseldorf Alemania) en serie a un solo sistema MS cuadrupolo proporcionado con ortogonal ionización química a presión atmosférica (APCI) y fuentes de ionización electrospray (ESI). Se utilizó una columna de Fenil Ascentis (250 4,6 mm de identificaci 5,0 m), (Supelco, Bellefonte, PA). condiciones de análisis fueron: fase móvil 40C:: Temperatura de eluyente A: agua eluyente B: acetonitrilo gradiente de la fase móvil fue el siguiente: 20 a 50 B en 37,5 min, 50-90 B en 16,67 min, y 90 B de 3 min. Volumen de inyección: 0,4 ml / min: 10 l, velocidad de flujo. Los espectros de UV se adquirieron en el intervalo de longitud de onda de 210,450 nm y los cromatogramas resultantes se integraron en diferentes longitudes de onda en función de los máximos de absorción UV de cada componente. MS condiciones operativas: Temperatura de ESI: 200C nebulizador caudal de gas: 1,5 ml / min línea curva de eliminación de disolvente (CDL) de temperatura: 250C. Los espectros de masas se adquirieron tanto en positivo y en el modo de barrido completo negativo en el intervalo de 150 900 m / z, con un rango de exploración de 1000 u / s. Identificación de los componentes se basó en sus espectros de UV, y la información de espectro de masas en comparación con los reportados en la literatura con la que están de acuerdo. Líneas celulares y virus africanos células de riñón de mono verde (Vero) (ATCC CCL-81) se cultivaron en medio de Eagle esencial mínimo (MEM) (Gibco / BRL, Gaithersburg, MD) suplementado con 10 suero de ternera fetal inactivado por calor (FCS) ( Gibco / BRL) y 1 solución de antibiótico-antimicótico (Zell Escudo, Minerva Biolabs GmbH, Berlín, Alemania), a 37ºC en una atmósfera de 5 de CO2. Un aislado clínico de HSV-2, sensible al aciclovir fue proporcionado amablemente por el Prof. M. Pistello, Universidad de Pisa, Italia. Una cepa de HSV-2 con resistencia fenotípica a aciclovir fue generada por el paso en serie en presencia de concentraciones crecientes de aciclovir como se ha descrito previamente por campo 22. El virus resistente fue luego purificado en placa, y la susceptibilidad antiviral se ensayó mediante un ensayo de reducción de placas que muestra una concentración inhibidora que produce el 50 reducción en la formación de placa (IC 50) de 319 cepas de M. virales se propagaron y se titula mediante ensayo de placas en células Vero , como se describió anteriormente 23. Reactivos La heparina (13,6 kDa) se obtuvo de Laboratori derivati ​​Organici Spa (Milán, Italia). Acyclovir (Sigma-Aldrich). células Vero ensayo de viabilidad celular se sembraron en placas de 96 pocillos a una densidad de 10 4 células / pocillo, y se incubaron a 37ºC en una atmósfera de CO2 al 5 por 24 h. Concentraciones crecientes del extracto de ensayo se añadieron a las células, con un número de duplicados de los tres pocillos por concentración. Después de un período de incubación de dos días, la viabilidad celular se midió por el MTS 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -5- (3-carboximetoxifenil) -2- (4-sulfofenil) -2H-tetrazolio ensayo por el CellTiter 96 Ensayo de proliferación de Kit (Promega, Madison, WI, EE. UU.) según las instrucciones del fabricante. Las absorbancias se midieron utilizando un lector de microplacas (modelo 680, BioRad) a 490 nm. La viabilidad de células resultante se calcula como se ha descrito previamente 24. Las 50 concentraciones citotóxicas (CC 50) y los intervalos de confianza del 95 (IC) se determinaron utilizando el software GraphPad PRISM (Graph-Pad Software, San Diego, CA). HSV ensayos antivirales La inhibición de la replicación de HSV se evaluó con el ensayo de reducción de placa y el ensayo de reducción de rendimiento del virus. células Vero se sembraron en placas de 24 pocillos a una densidad de 10 10 4 células. El ensayo de reducción de placas se realizó infectando monocapas de células con HSV-2 o HSV-2 mutante con resistencia fenotípica a aciclovir a una multiplicidad de infección (MOI) de 0,001 pfu / célula en presencia de diluciones en serie del extracto de prueba durante 2 horas a 37 ° C . Los inóculos fueron retirados posteriormente de los pozos, y las células se lavaron con medio dos veces y cubrieron con un medio que contiene 1,2 metilcelulosa (Sigma) y el extracto de la planta. Tratamiento de las muestras de control de volumen igual de DMSO se llevó a cabo con el fin de descartar la posibilidad de cualquier efecto citotóxico atribuible al disolvente. Después de la incubación durante 24 horas a 37ºC en 5 CO 2. se retiró el sobrenadante, y las células fueron fijadas y teñidas con violeta de cristal 0,1 en 20 etanol y se contaron las placas virales. Los valores de CI50, definida como la concentración inhibidora que produce el 50 reducción en la formación de placa, se calcularon utilizando el programa GraphPad PRISM 4 (GraphPad Software, San Diego, California, EE. UU.) para ajustar una curva dosis-respuesta sigmoidal de pendiente-variable. Un índice de selectividad (SI) se calculó dividiendo la CC 50 por los valores de CI50. Para el ensayo de reducción de rendimiento del virus, las células se infectaron por duplicado con HSV-2 a una MOI de 0,01 pfu / célula en presencia de diluciones en serie de extracto. Después de la adsorción del virus (2 horas a 37 ° C), el inóculo de virus se retiró y los cultivos se expusieron al extracto, y se incubó hasta que los cultivos de control muestran extensa citopatología. Los sobrenadantes se combinaron como apropiados 48 horas después de la infección y valoraciones de infectividad de virus libres de células se determinaron por duplicado mediante el ensayo de placas en monocapas de células Vero. Los puntos finales del ensayo fueron la concentración inhibidora del extracto que reduce el rendimiento del virus por 50 (IC 50) en comparación con el control de virus no tratado. ensayo virucida El efecto directo de extracto latifolia N. sobre la infección de HSV-2 se evaluó mediante la incubación de 33 g / ml de extracto con HSV-2 (10 5 pfu) en cualquiera de 4 o 37ºC durante diversos períodos de tiempo como se ha descrito previamente 25. 26. Después de la incubación, la infectividad del virus residual se determinó por titulación en células Vero a altas diluciones, en el que el extracto no estaba activo. ensayo de Pre-tratamiento se llevó a cabo el tratamiento previo tratamiento de las células Vero en placas de 24 pocillos con diferentes concentraciones de extracto por dos horas a 37ºC antes de la infección por virus. Después del lavado, las células se infectaron con HSV-2 a una MOI de 0,001 pfu / célula durante dos horas. Las células infectadas se lavaron y se trataron como se ha descrito anteriormente para el ensayo de reducción de placas. archivo adjunto ensayo El ensayo de unión se realizó como se describió previamente 25. 26 mediante la mezcla de extracto de N. latifolia o heparina con HSV-2 (MOI de 0.004 pfu / célula) a 4 ° C. Las mezclas se añadieron después a células Vero se enfrió en placas de 96 pocillos y se incubaron durante 2 h a 4ºC para permitir la unión pero no entrada. Después de tres lavados con MEM fría para eliminar el virus no unido, las células se cubrieron con medio que contiene 1,2 metilcelulosa y cambiaron a 37ºC. Después de 24 horas de incubación, las células se tiñeron y se contaron las placas virales. Como control, las células fueron infectadas en presencia de volúmenes iguales de DMSO de ajuste 100 de la infección en lugar, para confirmar la unión del virus pero la entrada no viral a 4 ° C, después de la incubación las células se trataron durante dos minutos con glicina ácida fría (glicina 100 mM, NaCl 150 mM , pH 3) para inactivar virus adjunto, resultando en 100 inhibición de la infección. ensayo de Entrada Para el ensayo de entrada, HSV-2 a una MOI de 0,004 pfu / célula se adsorbió durante 2 horas a 4ºC en células Vero confluentes preenfriada. Después, las células se lavaron con MEM frío tres veces para eliminar el virus no unido, tratados con diferentes concentraciones de extracto, y se incubaron durante tres horas a 37ºC. virus impenetrado se inactivaron con glicina ácida durante 2 minutos a temperatura ambiente, como se describió anteriormente 25. Después, las células se lavaron con medio caliente tres veces y se trataron como se ha descrito anteriormente para el ensayo de reducción de placas. ensayo de tratamiento post Para los ensayos de post-tratamiento Vero monocapas de células fueron infectadas con el VHS-2 durante dos horas a 37ºC, seguido de dos lavados suaves para eliminar los virus no unidos. Concentraciones crecientes de extracto A continuación se añadieron a los cultivos. Los valores de CI50 se mide por ensayo de reducción de placa y ensayo de reducción de rendimiento del virus, como se describe anteriormente. Estadísticas Los valores de IC50 se compararon mediante la suma de cuadrados extra prueba F del programa GraphPad Prism 4 (GraphPad Software, San Diego, California, EE. UU.). Los valores de p de 0,05 se consideraron indicativos de diferencias estadísticas. Los resultados representan la media de tres experimentos independientes desviaciones estándar. Resultados fitoquímico N. análisis latifolia pertenece a la familia Rubiaceae que se caracteriza por la presencia de diferentes clases de metabolitos secundarios, el más común y investigados de ellos son alcaloides y saponinas debido a sus propiedades biológicas. Figura 1 reporta el cromatograma de HPLC-PDA del extracto crudo de N. latifolia. La Tabla 1 muestra los componentes de la lista de los tentativamente identificados por HPLC-PDA-ESI-QMS en el extracto crudo, junto con sus máximos de absorción UV y MS datos. Los espectros de masas, adquirida en ionización ESI positivo y negativo (barrido completo), en general, dio protonado o desprotonado MH MH - iones moleculares, respectivamente, y, en modo positivo, algunos aductos de iones moleculares M N A y M K. La masa molecular de un componente desconocido se retuvo sólo cuando tanto MH y MH - se detectaron iones. Los principales componentes detectados en los extractos pertenecen a la clase de los alcaloides de indol característicos de Nauclea género. De acuerdo con los datos de la literatura, strictosamide (3, RT 21,675 min) parece ser el componente más abundante en N. latifolia extracto crudo sobre la base de su máximo de absorción UV y los iones moleculares en modo positivo y negativo ESI 27. Un componente menos abundante con máximos UV e iones moleculares analógica a strictosamide que puede ser la hipótesis como vincosamide (4, RT 25,184 min) también está presente. La presencia de pumiloside (1, RT 9,16 min) se confirma por comparación de su maxima UV y los iones moleculares con los reportados en la literatura 28. Compuesto 5 (RT 34,224 min) tentativamente se ha identificado como glucósido de ácido quinóvico (una saponina) sobre la base de sus datos espectrales y los reportados en la literatura 29. Otros componentes, probablemente pertenecientes a la misma clase (saponinas o alcaloides) sobre la base de sus espectros UV también se detectaron su identidad está siendo investigado. El análisis por HPLC-PDA del extracto crudo latifolia Nauclea. número de picos se hace referencia a los reportados en la Tabla 1. composición de extracto crudo latifolia Nauclea obtenida a través de HPLC-PDA-ESI-MS extracto de análisis Nauclea latifolia inhibe HSV-2 infectividad La actividad antiviral de un extracto de N. latifolia se examinó in vitro por el ensayo de reducción de placas en contra de un aislado clínico de HSV-2 sensible a aciclovir, y un mutante con resistencia fenotípica a acyclovir. Se infectaron células Vero con el virus en presencia de diferentes concentraciones de extracto, que van desde 100 g / ml a 0,13 g / ml, y se incubaron durante dos horas a 37ºC. Se añadieron las diluciones en serie de extracto de la planta de nuevo después de la eliminación del inóculo de virus. Las curvas de dosis-respuesta que se muestran en la Figura 2 demuestran que el extracto ejerce una notable actividad antiviral que es independiente de la sensibilidad virus al aciclovir. Los valores de IC50 para el HSV-2 aciclovir cepa sensible o resistente son 7,17 g / ml (IC del 95: 5,36 a 9,59) y 5,38 g / ml (IC del 95: 4.15 a la 6,99), respectivamente. La actividad antiviral del extracto fue confirmado por un ensayo de reducción de rendimiento del virus, una prueba más rigurosa que permite múltiples ciclos de replicación viral que se produzca antes de medir la producción de virus infecciosos. Bajo esta condición, el extracto reduce el rendimiento de la aciclovir sensible a HSV-2 con un valor de IC 50 de 1,46 g / ml (95 CI: 1,07-1,91). curva de dosis-respuesta de extracto latifolia N. aciclovir contra-sensible () y resistente al HSV-2 (). células Vero se infectaron a una MOI de 0,001 pfu / célula, expuesta durante 24 h a diferentes concentraciones de extracto y probado en un ensayo de reducción de placas. Los datos se presentan como de control. Los valores son la media SD de tres determinaciones independientes. Para examinar el efecto sobre la viabilidad celular, el extracto se diluye en serie y se añade a un medio de cultivo celular. Para todos los experimentos de cultivo de células diluciones de extracto de N. latifolia dieron como resultado una concentración de DMSO por debajo de 1, que no tuvo ningún efecto sobre las células y los virus. Después de 48 horas de incubación a 37ºC, la viabilidad de las células Vero se determinó por el ensayo de MTS. Como se informó en la figura 3. El extracto no afectó la viabilidad celular Vero en cualquier concentración ensayada. El valor de CC 50 estaba por encima de 100 g / ml, lo que indica que las actividades antivirales observados no se deben a la citotoxicidad. Por otra parte, no hay cambios en la morfología celular en comparación con el control fueron observadas por examen microscópico de las monocapas de células (datos no presentados). Según los resultados de ensayo de reducción de rendimiento del virus, el índice de selectividad, una medida de la actividad antiviral preferencial de un fármaco en relación a su citotoxicidad, está por encima de 68,4. Efecto de extracto de N. latifolia en no infectado células Vero viabilidad, como una función de la concentración a las 48 h. eje X: concentración del extracto, eje Y: la viabilidad celular (de control). Cada punto representa la media pm DE (N 3). Investigación de la principal mecanismo antiviral de acción del extracto Para explorar si el extracto ejerce una actividad directa de inactivación de virus, un ensayo virucida se llevó a cabo con una concentración del extracto que reduce casi completamente la infección por virus (IC 90). Para este objetivo, HSV-2 alícuotas se incubaron con 33 g / ml de extracto a 4ºC o 37ºC. Después de la incubación, las muestras se titularon en células Vero a altas diluciones en el que el extracto no estaba activo. Como se informó en la Tabla 2. Este tratamiento no produjo una pérdida significativa de HSV-2 infectividad, incluso a una concentración superior a su IC 50. Por lo tanto, ya que la actividad antiviral no se ejerció directamente en HSV-2 partículas antes, hemos explorado el efecto del extracto sobre la interacción virus-célula realización de ensayos específicos. ensayo virucida: efecto de la preincubación de extracto latifolia N. con HSV-2 un Concentración: 33 g / ml. b Los valores son los medios SD de los datos derivados de tres experimentos independientes realizados por duplicado. Para identificar la fase del ciclo de replicación del virus en el que actúa el extracto, que se añadió a las células Vero confluentes en diferentes intervalos de tiempo relativos a la infección por el virus. En todos los experimentos con células infectadas con el virus no tratado fueron utilizados como control y la inhibición de la formación de placas por el extracto se evaluó (Figura 4). Efecto del tratamiento latifolia N. en la formación de placa cuando se añade a cultivos de células a diferentes intervalos de tiempo relativas a la infección por virus. Las células fueron pre-tratadas con el extracto antes de la infección por el virus (pre-tratamiento), durante el período de unión (unión), durante el período de entrada (entrada) o después de la infección (post-tratamiento). Los datos se presentan como de control. Los valores son la media SD de tres determinaciones independientes. El ensayo de pre-tratamiento muestra que varias dosis de extracto de N. latifolia añadieron 2 horas antes de la infección por el virus y luego ser lavado a cabo no ejercer actividad inhibidora. A continuación, se añadieron mezclas de HSV-2 y diferentes concentraciones de extracto de células Vero y se incubaron durante dos horas a 4ºC para investigar el posible efecto sobre la unión del virus a las células. Un ligero efecto dosis-respuesta de extracto de la unión del virus se observó con una IC50 de 56.18 g / ml (IC del 95: 38.0 a la 82.89). Puesto que este valor es de más de dos log mayor que el valor IC 50 de la heparina (0,14 g / ml), un inhibidor conocido de la unión HSV (datos no mostrados) 30, estos datos sugieren que la inhibición de la unión no es el principal mecanismo de acción de extracto de N. latifolia. El ensayo de entrada se llevó a cabo para evaluar si el extracto impide la penetración viral en las células huésped. Como se muestra en la Figura 4 el extracto no actúa en esta etapa del ciclo de replicación del virus. En contraste, cuando se añadió el extracto al medio de recubrimiento después de la entrada de virus en células Vero, se observó una supresión significativa de HSV-2 replicación con un valor de IC 50 de de 3,63 g / ml (95 CI: 2.6 a 5.8). El fuerte efecto inhibidor del extracto probado en el ensayo de post-tratamiento también fue confirmada por el ensayo de reducción de rendimiento del virus con una CI 50 de 8,23 g / ml (95 CI: 5,33-12,70) (Figura 4). Discusión N. latifolia pertenece a Rubiaceae, una gran familia que comprende más de 630 géneros y cerca de 13.000 especies de plantas. Algunos de ellos, incluyendo N. latifolia, se utilizan en la medicina tradicional subsahariana para el tratamiento de varias enfermedades que sugiere que pueden representar una fuente natural de sustancias farmacológicamente activas 31. Aunque varios estudios indicó un potencial uso terapéutico de N. latifolia 16 18 32 34 en el mejor de nuestro conocimiento de su actividad antiviral no se ha investigado hasta ahora. Para explorar el potencial antiviral de N. latifolia, HSV-2 fue elegida como modelo viral, porque este virus tiene un fuerte impacto en la transmisión y adquisición del VIH 9. 35. 36. De hecho, se ha propuesto que en las zonas con una alta prevalencia de VIH y HSV-2, tales como el África subsahariana, la terapia antiviral contra HSV-2 podría tener un impacto a nivel de la población sobre la epidemia mundial de VIH 8. 9. 37. 38. Dentro de un estudio para detectar la actividad biológica de las plantas nativas de África central, los presentes informes de estudios por primera vez una notable actividad anti-HSV-2 de un CH 2 Cl 2 cortezas de raíz MeOH extracto de N. latifolia. A pesar de un extracto crudo puede contener varias moléculas dotados de actividad antiviral cada uno actuando a través de un mecanismo diferente algunas conclusiones preliminares se pueden dibujar en el principal modo de acción antiviral. Profundizar aún más en la composición de extracto de N. latifolia están en marcha. El ensayo virucida descarta la posibilidad de que la actividad antiviral del extracto se ejerce por una inactivación directa de la partícula de virus. Tiempo de experimentos de adición reveló que la inhibición más fuerte se produce cuando se añade el extracto después de la infección. Estos hallazgos indican que el principal mecanismo de acción no es la inhibición de la fijación del virus o de entrada. Además, el HSV-2 cepa resistente a aciclovir fue tan susceptibles al extracto de N. latifolia como la cepa sensible a aciclovir, lo que sugiere que el modo de acción antiviral es diferente de la de aciclovir. Esta última característica, además de una citotoxicidad baja y un índice de selectividad favorable hacer que los latifolia N. extraer un material de partida prometedor para un fraccionamiento bioguided el objetivo de identificar contra HSV-2-compuestos con un nuevo mecanismo de acción que se puede utilizar contra el aciclovir resistentes a HSV-2 cepas. Conclusión Los resultados del presente estudio están en línea con el uso de latifolia N. para el tratamiento de enfermedades virales en la medicina popular africana. Los valores de IC50 permiten que nosotros creamos que N. raíces latifolia constituyen una fuente natural de anti-HSV2 sustancias, aunque aún queda trabajo por hacer a fin de aislar el principio activo y dilucidar su mecanismo de acción, o para desarrollar un fitofármaco a partir de N . latifolia CH2Cl2 / MeOH extracto. Datos de los autores MD es un profesor asistente que trabaja en el Laboratorio de Virología Molecular, Universidad de Turín, Italia. HMN es un estudiante de doctorado que trabajan en el Laboratorio de Microbiología y antimicrobianos de Sustancias de la Universidad de Dschang, Camerún. Se le concedió una financiación por el programa AIRES-Sud para una pasantía en el Laboratorio de Virología Molecular de la Universidad de Turín para aprender las técnicas de ensayos antivirales. RANN es Profesor Asociado, Jefe del Departamento de Bioquímica de la Universidad de Douala, Camerún coordinó el número de proyecto financiado AIRES-Sud 7082. Ella es también uno de la señorita Magnifouets supervisores de doctorado. DG es Profesor Asociado, Profesor titular en el Departamento de Bioquímica de la Universidad de Dschang, Camerún que es, además, uno de los supervisores de doctorado se pierda Magnifouets. ATT es de Senoir investigador en el Laboratorio de Fitoquímica del Instituto de Investigación Médica y plantas medicinales Estudios en Yaoundé, Camerún. VC es estudiante de doctorado que trabajan en el Laboratorio de Virología Molecular, Universidad de Turín, Italia. RR es Master of Science realizó su investigación en el Laboratorio de Virología Molecular, Universidad de Turín, Italia. CC es un profesor asistente que trabaja en el laboratorio de Phytoanalysis en el Departamento de Ciencia y Tecnología de Drogas de la Universidad de Turín. FFB es Profesor Adjunto, Jefe del Laboratorio de Phytobiochemistry y plantas medicinales estudio de la Universidad de Yaoundé, Camerún, además de que es uno de los supervisores de doctorado se pierda Magnifouets. PR es el profesor, conferenciante mayor que trabaja en el Laboratorio de Phytoanalysis en el Departamento de Ciencia y Tecnología de Drogas de la Universidad de Turín, Italia. CB es el profesor, jefe del Laboratorio de Phytoanalysis, en el Departamento de Ciencia y Tecnología de Drogas de la Universidad de Turín, Italia. Él es director de investigación Caglieros. DL es el profesor, jefe del Laboratorio de Virología Molecular, Universidad de Turín, Italia. También es Donalisios Cagnos y Rovito supervisor de investigación. Herpes simplex virus abreviaturas de intereses Los autores declaran que no tienen intereses en competencia. Autores de las contribuciones MD realizan los ensayos antivirales, produjeron el aciclovir resistente al VHS-2 cepa, hizo el análisis estadístico de los datos y redactó el manuscrito. HMN recogió datos etnobotánicos en la planta, así como la propia planta en el campo, preparar el extracto crudo, participaron en ensayos antivirales y redacción de manuscritos. RANN, DG y FFB estaban involucrados en la concepción y supervisión (datos etnobotánica y la recolección de plantas en el campo) de este trabajo, y de revisión profunda. ATT proporcionan medios de laboratorio para la preparación del extracto crudo y revisó el manuscrito. RR y VC hicieron el tiempo virus de ensayos de adición. PR, CC y CB realizó el análisis fitoquímico en N. latifolia extracto crudo e interpretan los datos obtenidos. DL supervisó el trabajo en conjunto y proporcionan medios de laboratorio para los ensayos antivirales. Todos los autores contribuyeron sustancialmente al presente trabajo, entonces leído y aprobado el manuscrito final. Autores afiliaciones Laboratorio de Virología Molecular, Departamento de Ciencias Clínicas y Biológicas de la Universidad de Turín Laboratorio de Microbiología y antimicrobianos de Sustancias de la Universidad de Dschang Laboratorio de Bioquímica, Universidad de Douala Laboratorio de Fitoquímica, Instituto de Investigación Médica y las plantas medicinales estudios de laboratorio de Phytoanalysis, Departamento de Ciencia y Tecnología de Drogas, Universidad de Turín Laboratorio de Phytobiochemistry y estudio de las plantas medicinales, Departamento de Bioquímica, Universidad de Yaoundé Departamento de Ciencias clínicas y Biológicas de la Universidad de Turín, hospital de S. Luis Gonzaga Referencias Whitley RJ, Roizman B: Herpes simple infecciones de virus. Lanceta. 2001, 357: 1513-1518. 10.1016 / S0140-6736 (00) 04638-9. 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